人(Human)P選擇素(P-Selectin)ELISA檢測試劑盒貨號(hào):DM-H325規(guī)格:96T/48T一、產(chǎn)品概述上海篤瑪生物科技有限公司是專注于生命科學(xué)領(lǐng)域的高科技企業(yè),秉承“以客戶為中心、以產(chǎn)品為保障、以誠信為基礎(chǔ)、以創(chuàng)新為宗旨”的發(fā)展理念,致力于為全球科研工作者提供高質(zhì)量的生物學(xué)試劑及解決方案。本試劑盒是公司核心產(chǎn)品線之一,采用自主研發(fā)的高特異性抗體對(duì),基于經(jīng)典的雙抗體夾心法原理構(gòu)建,可**定量檢測樣本中的含量。二、檢測原理本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA技術(shù):將特異性捕獲抗體預(yù)包被于酶標(biāo)板微孔內(nèi);實(shí)驗(yàn)時(shí),向微孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本,樣本中的檢測指標(biāo)會(huì)與包被抗體特異性結(jié)合;洗滌去除未結(jié)合的雜蛋白后,加入生物素標(biāo)記的檢測抗體,形成“包被抗體-目標(biāo)抗原-檢測抗體”的免疫復(fù)合物;隨后加入鏈霉親和素標(biāo)記的辣根過氧化物酶(HRP),生物素與鏈霉親和素發(fā)生特異性結(jié)合,使HRP牢固結(jié)合于免疫復(fù)合物上;*后加入TMB顯色底物,HRP催化底物發(fā)生顯色反應(yīng),顏色深淺與樣本中檢測指標(biāo)的濃度呈正相關(guān)。通過酶標(biāo)儀在450nm波長處測定各孔OD值,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出待測樣本的濃度。三、試劑盒的組分本試劑盒包含完成一次ELISA檢測所需的全部核心組分,各組分經(jīng)嚴(yán)格質(zhì)檢,確保實(shí)驗(yàn)可靠性,具體如下:四、樣本處理1. 血清樣本:采集靜脈血后,室溫靜置2-4小時(shí),3000rpm離心10分鐘,收集上層血清,避免溶血,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。2. 血漿樣本:使用抗凝管(EDTA、肝素等)采集血液,采集后立即輕輕顛倒混勻,3000rpm離心10分鐘,收集上層血漿,-20℃或-80℃保存。3. 組織培養(yǎng)上清:細(xì)胞培養(yǎng)完成后,3000rpm離心5分鐘,去除細(xì)胞碎片,收集上清液,-20℃保存。4. 細(xì)胞/組織裂解液:取適量細(xì)胞或組織樣本,加入預(yù)冷的裂解液,冰浴勻漿后,4℃、12000rpm離心15分鐘,收集上清液,-80℃保存。5. 所有樣本在檢測前需恢復(fù)至室溫,震蕩混勻,若有沉淀需再次離心去除,避免影響檢測結(jié)果。根據(jù)樣本實(shí)際情況,可使用樣本稀釋液進(jìn)行適當(dāng)稀釋,確保檢測濃度落在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。五、實(shí)驗(yàn)步驟1. 試劑準(zhǔn)備:實(shí)驗(yàn)前將所有試劑盒組分及樣本恢復(fù)至室溫(25℃左右),濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋至1×工作液,濃縮檢測抗體、鏈霉親和素-HRP按說明書比例用樣本稀釋液稀釋至工作液,現(xiàn)配現(xiàn)用。2. 加樣:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求確定所需板條數(shù)量,空白孔加入50μL樣本稀釋液,標(biāo)準(zhǔn)品孔加入50μL不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品工作液,待測樣本孔加入50μL處理后的樣本(已稀釋的樣本直接加入,未稀釋樣本可根據(jù)情況用樣本稀釋液1:1稀釋后加入);隨后向所有孔中加入50μL生物素標(biāo)記檢測抗體工作液,輕輕振蕩混勻。3. 孵育:蓋上封板膜,置于37℃恒溫箱中孵育60分鐘。4. 洗滌:小心揭開封板膜,甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿1×洗滌液,靜置30秒后甩去,用吸水紙拍干;重復(fù)此洗滌步驟3次,若使用洗板機(jī),洗滌次數(shù)可增加1次。5. 加酶:每孔加入80μL鏈霉親和素-HRP工作液,輕輕振蕩混勻,蓋上封板膜,37℃孵育30分鐘。6. 洗滌:重復(fù)步驟4的洗滌操作,徹底去除未結(jié)合的酶結(jié)合物。7. 顯色:每孔依次加入50μL顯色液A和50μL顯色液B,輕輕振蕩混勻,蓋上封板膜,37℃避光孵育10分鐘,此時(shí)陽性孔會(huì)逐漸呈現(xiàn)藍(lán)色。8. 終止:取出酶標(biāo)板,迅速向每孔加入50μL終止液,輕輕振蕩混勻,藍(lán)色會(huì)立即轉(zhuǎn)為黃色。9. 檢測:加入終止液后10分鐘內(nèi),使用酶標(biāo)儀在450nm波長處測定各孔的OD值(若需校正,可在630nm波長處測定參考OD值,*終檢測OD值=450nm OD值-630nm OD值)。六、結(jié)果計(jì)算1. 首先計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、空白孔及樣本孔的平均OD值(復(fù)孔檢測時(shí)),空白孔OD值作為陰性對(duì)照,用于扣除背景干擾。2. 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X軸,對(duì)數(shù)坐標(biāo)),對(duì)應(yīng)的OD值為縱坐標(biāo)(Y軸,線性坐標(biāo)),使用專業(yè)繪圖軟件(如Excel、GraphPad Prism)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程(R2值應(yīng)≥0.99,確保標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性)。3. 將扣除背景后的樣本OD值代入回歸方程,計(jì)算出樣本中[檢測指標(biāo)]的初步濃度,再根據(jù)樣本的稀釋倍數(shù)計(jì)算出樣本的實(shí)際濃度。七、試劑盒性能1. 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。2. 靈敏度:*低檢測濃度如說明書所示。3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。4. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。6. 有效期:6個(gè)月八、儲(chǔ)存與運(yùn)輸1. 試劑盒未開封時(shí),所有組分需密封置于2~8℃冷藏保存,避免冷凍,其中標(biāo)準(zhǔn)品凍干品可置于-20℃長期保存。2. 試劑盒開封后,預(yù)包被酶標(biāo)板需密封防潮保存,剩余試劑需按原儲(chǔ)存條件保存,避免反復(fù)凍融,開封后建議在1個(gè)月內(nèi)用完。3. 運(yùn)輸過程采用冷鏈運(yùn)輸(2~8℃),避免高溫、劇烈震蕩,確保產(chǎn)品性能穩(wěn)定。九、注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說明書,嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟操作,確保實(shí)驗(yàn)條件(溫度、孵育時(shí)間)符合要求。所有試劑使用前需充分混勻,但避免劇烈震蕩產(chǎn)生大量泡沫,以免影響加樣精度。洗滌步驟至關(guān)重要,需確保洗滌充分,避免未結(jié)合的雜蛋白或酶結(jié)合物殘留,導(dǎo)致背景值偏高。顯色反應(yīng)需避光進(jìn)行,終止液加入后應(yīng)立即檢測OD值,避免放置時(shí)間過長導(dǎo)致顏色消退,影響檢測結(jié)果。實(shí)驗(yàn)所用樣本、試劑及廢棄物均需按生物安全規(guī)范處理,避免交叉污染。本試劑盒僅用于科研用途,不用于臨床診斷。十、售后服務(wù)上海篤瑪生物科技有限公司擁有專業(yè)的技術(shù)服務(wù)團(tuán)隊(duì),為您提供全程技術(shù)支持。如您在產(chǎn)品使用過程中有任何疑問,或?qū)Ξa(chǎn)品質(zhì)量有異議,請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系我們的技術(shù)顧問,我們將在24小時(shí)內(nèi)響應(yīng),為您提供實(shí)驗(yàn)方案優(yōu)化、問題排查等專業(yè)服務(wù)。 聯(lián)系電話:400-9681786官網(wǎng):www.great-future.cn郵箱:dm_support@sina.com生產(chǎn)廠家:上海篤瑪生物科技有限公司
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